多功能柱凈化高效液相色譜法

1．原理

樣品中的黃曲霉毒素B1.黃曲霉毒素B2.黃曲霉毒素G1.黃曲霉毒素G2用乙腈一水(84+16)提取，過濾稀釋后用多功能柱凈化。凈化液吹干后，加入流相定量，用液相色譜器測量各種黃曲霉毒素的含量，用外標法測量。

2.試劑和材料。

甲醇(液相色譜純).乙腈(色譜純).硝酸(65%).溴化鉀.多功能凈化柱(My-coseP226)。

黃曲霉毒素B1.黃曲霉毒素B2.黃曲霉毒素G1.黃曲霉毒素G2標準產品。黃曲霉毒素B1.黃曲霉毒素Gl2.0μg/L，黃曲霉毒素B2.黃曲霉毒素G20.5μg/L溶于乙腈。

標準儲備溶液：以乙腈稀釋至10.0ml為標準儲備溶液，準確取出上述1.0ml黃曲霉毒素標準溶液。標準工作液：以乙腈稀釋至10.0ml為標準工作液，準確取出上述黃曲霉毒素標準儲備溶液。

3．儀器

稱重平衡。高速均質器。高效液相色譜儀(熒光探測器)。柱后衍生裝置。真菌毒素蒸發器。均質器。色譜柱(C18柱，柱長150mm，內徑4.6mm，填料直徑5μm)。

4.測量步驟。

(1)在500毫升具塞錐形瓶中加入100毫升乙腈一水(84+16，體積)提取物約25g(準確至0.1g)，用均質器高速攪拌提取3min過濾。

(2)在多功能柱凈化吸收約55ml濾液和人多功能柱的試管中，將MFC柱套管放入試管中。慢慢將套管推到試管底部，使提取物通過MFC柱進入套管。將1.0ml凈化液從套管中準確移除到5ml棕色小瓶中。在50℃下吹干。HPLC分析使用過0.45μm濾膜。

(3)測定

①色譜條件色譜柱:15cm×4.6mm(內徑)、5μm、LichroCARTC18柱。流動相甲醇-乙腈-水(215+215+570，體積)，每升加入120mg溴化鉀和200μL硝酸，流速1.0ml/min。檢測條件:刺激波長365nm，發射波長440nm。進樣量:100bμL(樣液)。柱后衍生裝置:100μA。

②色譜測定通過程序進樣取出適量的標準儲備溶液，稀釋成5種不同濃度的標準工作液。黃曲霉毒素B1。黃曲霉毒素B2。黃曲霉毒素Gl。黃曲霉毒素G2的響應值和相當于樣品中黃曲霉毒素含量的線性方程，并處理樣品的色譜數據。在上述色譜條件下，黃曲霉毒素B1。黃曲霉毒素B2。黃曲霉毒素G2。黃曲霉毒素G2衍生物的保留時間約為3.5min：4.2min.4.7min.5.7min。